Tinción simple

Tinción simple

La mayoría de los colorantes utilizados en las tinciones positivas son colorantes derivados de las anilinas, sales orgánicas intensamente pigmentadas que proceden del alquitrán. Se denominan colorantes básicos si el cromóforo (porción coloreada) de la molécula está cargada positivamente, por ejemplo, cristal violeta  y azul de metileno son colorantes básicos. Otros colorantes de esta categoría utilizados con frecuencia en bacteriología son safranina, fuchina básica y verde malaquita. Bajo condiciones normales de crecimiento, la mayor parte de los procariotas tienen un pH interno próximo a la neutralidad (pH 7.0) y una superficie celular cargada negativamente, así los colorantes básicos son los más eficaces. Colorantes ácidos Con rojo Congo, rosa de bengala, eosina y fuchina ácida tiene un cromóforo cargado negativamente y son utilizados para teñir positivamente ciertos componentes como las proteínas.

Existen diferentes tipos de tinciones: simple, diferencial y selectiva, de acuerdo con el número y tipo de colorantes utilizados y de los objetivos de estudio. La tinción que hace uso de un solo colorante es la simple.

Objetivos

1.     Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.

2.     Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.

3.     Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.

4.     Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.

MATERIALES

Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos microscopio Soporte de tinción Muestras bacterianas de origen natural: yogur, sarro

Colorantes para tinción: a) Solución de nigrosina o eoisna 1% b) Solución de safranina al 0,5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersión

BACTERIAS DEL YOGURT

 El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

Procedimiento

1.                Extension: Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.

2.                Fijación Fijar  con metanol o Xilol  para eliminar parte de la grasa.

3.                Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul de metileno ocon un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5 minutos.

4.                Lavar con agua destilada

5.                Secar. pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.

6.                añadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos

7.                Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×

Resultados 

Contestar las siguientes preguntas:

1) El yogur es un alimento más fácilmente digerible que la leche, ¿por qué?

R/. Es debido  a que los cultivos de bacterias que contiene el yogur rompen las cadenas de lactosa y la hacen mas facil de digerir. el proceso de hacer yogur tambien modifica las proteínas de la leche haciendolas mas digerible. 

2) En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué alimento será más fácilmente tolerado, la leche o el yogur? ¿Por qué?

R/. El yogur, porque es un derivado de la leche y se elabora mediante la fermentación bacteriana de leche que transforma a los azucares en ácidos, así la lactosa se convierte en ácido láctico. El menor contenido de  lactosa del yogur con respecto a la leche, hace que sea mejor tolerado por quienes no consumen leche habitualmente y ademas, permite comenzar a tolerar la lactosa. 

3) ¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la formación del yogur a partir de la leche?

R/. Tanto Lactobacillus bulgaris como Streptococcus thermophilus realizan la fermentación del ácido lactico. Transforman los azucares presentes en la leche (lactosa formada por glucosa y galactosa) en ácido lactico. se trata de un proceso anaerobico que confiere acidez al yogur. 

4) ¿Qué otros procesos conoces en  que se empleen bacterias para la elaboración de algún producto alimenticio?

Proceso	Organismo	Papel en proceso	molécula original	Producto final
Fabricación de la cerveza	Saccharomyces cerevisidae(levadura)	Fermentación alcohólica y carbonatación	Glucosa i/o fructosa	Etanol +CO2
F. del pan	S. cerevisidae	Fermentación y carbonatación	Azucar	Co2
F. del vinagre	Bacterias del ácido acético	Oxidación aerobios estrictos	Alcohol (etanol)	Acido acético